Cell therapy in the treatment of intervertebral disc degeneration / Terapia celular no tratamento da degeneração de disco intervertebral / Terapia celular en el tratamiento de la degeneración de disco intervertebral

ABSTRACT Approximately 80% of the world population experiences some type of back pain at some point in their life, and in 10% of this population the pain causes chronic disability resulting in a high cost for the treatment of these patients, in addition to compromising their work and social interaction abilities. Current treatment strategies include the surgical procedure for degenerated intervertebral disc resection, the nerve root block and physiotherapy. However, such treatments only relieve symptoms and do not prevent the degeneration of intervertebral discs. Therefore, new therapeutic strategies have emerged and include manipulating cells to recover the degenerated disc. This article will discuss the possible cell therapy alternatives used in the disc regeneration process, featuring a descriptive study of translational medicine that involves clinical aspects of new treatment alternatives and knowledge of basic research areas, such as cellular and molecular biology. Level of evidence V; Expert Opinion.

RESUMO Aproximadamente 80% da população mundial sofre algum tipo de dor nas costas em alguma fase de vida, sendo que em 10% dessa população, as dores acarretam incapacidade crônica, deflagrando alto custo de tratamento desses pacientes, além de comprometer as habilidades de trabalho e convívio social desses indivíduos. As estratégias de tratamento atuais incluem o procedimento cirúrgico por ressecção do disco intervertebral degenerado, bloqueio de raízes nervosas e fisioterapia. Entretanto, tais tratamentos apenas aliviam os sintomas e não impedem que ocorra a degeneração de discos intervertebrais. Portanto, novas estratégias terapêuticas têm surgido e incluem a manipulação de células com o objetivo de recuperar o disco degenerado. No presente artigo, serão discutidas as diferentes possibilidades alternativas de terapias celulares no processo de regeneração discal, caracterizando um estudo descritivo da medicina translacional que envolve aspectos clínicos de novas alternativas de tratamento e o conhecimento de áreas básicas de pesquisa como biologia celular e molecular. Nível de evidência V; Opinião do Especialista.

RESUMEN Aproximadamente 80% de la población mundial sufre algún tipo de dolor de espalda en alguna etapa de la vida, y en 10% de esa población, los dolores causan incapacidad crónica, deflagrando alto costo de tratamiento de esos pacientes, además de comprometer las habilidades laborales y convivencia social de esos individuos. Las estrategias de tratamiento actuales incluyen el procedimiento quirúrgico para la resección del disco intervertebral degenerado, bloqueo de las raíces nerviosas y fisioterapia. Entretanto, tales tratamientos solo alivian los síntomas y no impiden que ocurra la degeneración de discos intervertebrales. Por lo tanto, han surgido nuevas estrategias terapéuticas e incluyen la manipulación de células con el objetivo de recuperar el disco degenerado. En el presente artículo se discutirán las diferentes posibilidades alternativas de las terapias celulares en el proceso de regeneración discal, caracterizando un estudio descriptivo de la medicina traslacional que involucra aspectos clínicos de nuevas alternativas de tratamiento y conocimiento de áreas básicas de investigación como biología celular y molecular. Nivel de evidencia V; Opinión del especialista.

In Vitro Effect of Low-Level Laser Therapy on Undifferentiated Mouse Pulp Cells / Efeito in Vitro da Laserterapia de Baixa Intensidade em Células Pulpares Indiferenciadas de Camundongo

Low-level laser therapy has been investigated as a possible stimulus for enhancement of proliferation and differentiation of various cell types, but few reports relate undifferentiated mouse pulp cells (OD-21) response to irradiation in in vitro models. The aim of this study was to analyze the influence of low-level laser therapy (λ=660 nm), with three different irradiation times, on the behavior of OD-21 cell line. The cells were cultivated and divided into three groups: non-irradiated/control (group I); irradiated with 88 s (group II); irradiated with 177 s (group III) and irradiated with 265 s (group IV). Cell growth and viability were assessed after 7 and 10 days. Data were analyzed by Kruskal-Wallis and MannWhitney tests (α=.05). At day 7, there was a higher cell growth in groups I and II, as compared to group IV (p<.01). At the 10th day, group I showed a higher cell growth as compared to group II (p<.05). Cell viability in group IV was significantly lower at the 7th day, as compared to groups I (p<.001), II (p<.01) and III (p<.001). Cell viability in all the groups was over 80%, except in group IV at day 7. Irradiation time of group I influenced positively the proliferation and viability of OD-21 cells in late cell culture period. (AU)

A terapia a laser de baixa intensidade tem sido investigada como possível estímulo para aumento da proliferação e diferenciação de vários tipos de células, mas poucos relatos relacionam a resposta de células indiferenciadas da polpa dentária de camundongos (OD-21) à irradiação em modelos in vitro. O objetivo deste estudo foi analisar a influência do laser de baixa intensidade (λ=660 nm), com três períodos de irradiação diferentes, no comportamento das células da linhagem OD-21. As células foram cultivadas e distribuídas em três grupos: não irradiado / controle (grupo I); irradiado com 88 s (grupo II); irradiado com 177 s (grupo III) e irradiado com 265 s (grupo IV). O crescimento e a viabilidade celular foram avaliados após 7 e 10 dias. Os dados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (α = 0,05). No dia 7, houve crescimento celular maior nos grupos I e II, em comparação ao grupo IV (p <0,01). No décimo dia, o grupo I apresentou crescimento celular superior ao grupo II (p <0,05). A viabilidade celular no grupo IV foi significativamente menor no sétimo dia, em comparação aos grupos I (p <0,001), II (p <0,01) e III (p <0,001). A viabilidade celular em todos os grupos foi superior a 80%, exceto no grupo IV no dia 7. O tempo de irradiação do grupo I influenciou positivamente a proliferação e a viabilidade das células OD-21 no período mais tardio da cultura celular.A terapia a laser de baixa intensidade tem sido investigada como possível estímulo para aumento da proliferação e diferenciação de vários tipos de células, mas poucos relatos relacionam a resposta de células indiferenciadas da polpa dentária de camundongos (OD-21) à irradiação em modelos in vitro. O objetivo deste estudo foi analisar a influência do laser de baixa intensidade (λ=660 nm), com três períodos de irradiação diferentes, no comportamento das células da linhagem OD-21. As células foram cultivadas e distribuídas em três grupos: não irradiado / controle (grupo I); irradiado com 88 s (grupo II); irradiado com 177 s (grupo III) e irradiado com 265 s (grupo IV). O crescimento e a viabilidade celular foram avaliados após 7 e 10 dias. Os dados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (α = 0,05). No dia 7, houve crescimento celular maior nos grupos I e II, em comparação ao grupo IV (p <0,01). No décimo dia, o grupo I apresentou crescimento celular superior ao grupo II (p <0,05). A viabilidade celular no grupo IV foi significativamente menor no sétimo dia, em comparação aos grupos I (p <0,001), II (p <0,01) e III (p <0,001). A viabilidade celular em todos os grupos foi superior a 80%, exceto no grupo IV no dia 7. O tempo de irradiação do grupo I influenciou positivamente a proliferação e a viabilidade das células OD-21 no período mais tardio da cultura celular. (AU)

Estudo comparativo da inibição da proliferação de fibroblastos in vitro na conjuntiva utilizando mitomicina C e ciclofosfamida / Comparative study of inhibition of fibroblasts proliferation in vitro in the conjunctiva using mitomycin and ciclophosphamide

RESUMO Objetivo: Avaliar a inibição da proliferação de fibroblastos in vitro das conjuntivas obtidas através de exérese de pterígios de pacientes utilizando mitomicina C (MMC) e ciclofosfamida (CF). Métodos: Os pterígios foram retirados de 7 pacientes e submetidos a cultivo celular. Após o cultivo, 3 fragmentos de dimensões iguais deste material foram colhidos de áreas adjacentes do pterígio removido de cada paciente. Eles foram randomicamente selecionados de tal forma que: um fragmento de cada paciente foi exposto: ao meio de cultura (grupo controle), a MMC e a CF por igual período de tempo nas concentrações de 0,4 mg/ml e 10 mg/ml respectivamente. Após este período realizou-se a contagem celular de fibroblastos destes 3 grupos. Cada grupo continha 7 fragmentos. Resultados: Com a utilização da MMC tivemos uma taxa de 95% da inibição da proliferação dos fibroblastos, enquanto com a CF 100%. Conclusões: Ambas as drogas apresentaram elevada taxa da inibição da proliferação de fibroblastos, porém a CF apresentou inibição maior que a MMC.

Abstract Objective: To evaluate the inhibition of fibroblast proliferation in vitro of conjunctiva obtained by excision of pterygium from patients using mitomycin (MMC) and cyclophosphamide (CF). Methods: Pterygiums were removed from 7 patients and subjected to cell culture. After cell cultivation, 3 fragments of equal dimensions of these tissues were collected from adjacent areas of each patient removed pterygium. They were randomly selected in such a way that one fragment of each patient was exposed to: the culture medium (group control), to MMC and to CF for an equal period of time at concentrations of 0,4 mg/dl and 10 mg/dl respectively. After this period, the fibroblast cell count of these groups were performed. Each group had seven fragments. Results: With the use of MMC we had a 95% rate of inhibition of fibroblast proliferation, while with CF 100%. Conclusion: Both drugs showed a high rate of inhibition of fibroblast proliferation, but CF showed greater inhibition than MMC.

Diagnosis and treatment of HEp-2 cells contaminated with mycoplasma / Diagnóstico e tratamento de células HEp-2 contaminadas por micoplasma

Abstract Contamination of primary and cell cultures by mycoplasmas is one of the main economic and biological pitfalls in basic research, diagnosis and manufacture of biotechnological products. It is a common issue which may be difficult to conduct surveillance on. Mycoplasma presence may affect several physiological parameters of the cell, besides being considered an important source of inaccurate and/or non-reproducible scientific results. Each cell type presents characteristical symptoms, mainly morphological, that indicate a contamination by mycoplasma. HEp-2 cells originate from carcinoma of the larynx and are, therefore, part of the respiratory tract, which is one of mycoplasma habitats. Despite the importance these cells in several biological research (evaluation of cell proliferation and migration, apoptosis, antiviral and antitumor compounds), the alterations induced by mycoplasma contamination in HEp-2 cells have not yet been described. Here, we describe the progressive morphological alterations in culture of HEp-2 cells infected with mycoplasma, as well as the-diagnosis of the infection and its treatment. Mycoplasma contamination described within this work led to cytoplasm elongation, cell-to-cell spacing, thin plasma membrane projections, cytoplasmic vacuoles, fusion with neighboring cells, and, finally, cell death. Contamination was detected by fluorescence imaging (DAPI) and PCR reactions. The cultures were treated with BM-Cyclin antibiotic to eliminate contamination. The data presented here will be of relevance to researchers whose investigations involve cell culture, especially respiratory and HEp-2 cells.

Resumo A contaminação de culturas primárias e celulares por micoplasmas é uma das principais armadilhas econômicas e biológicas da pesquisa básica, diagnóstico e fabricação de produtos biotecnológicos. Trata-se de uma contaminação rotineira, mas de difícil acompanhamento. A presença de micoplasma pode afetar vários parâmetros fisiológicos da célula, além de ser considerada uma importante fonte de resultados científicos imprecisos e/ou não reprodutíveis. Cada tipo de célula apresenta sintomas característicos, principalmente morfológicos, que indicam uma contaminação por micoplasma. As células HEp-2 são originárias do carcinoma da laringe e, portanto, fazem parte do trato respiratório, um dos habitats do micoplasma. Apesar da importância destas células em diversas pesquisas biológicas (avaliação da proliferação e migração celular, apoptose, compostos antivirais e antitumorais), as alterações decorrentes da contaminação por micoplasma nestas células ainda não foi descrita. Aqui, descrevemos as alterações morfológicas progressivas na cultura de células HEp-2 infectadas por micoplasma, bem como o diagnóstico da infecção e seu tratamento. A contaminação por micoplasma descrita neste trabalho resultou em alongamento citoplasmático, espaçamento entre células, projeções delgadas da membrana plasmática, vacúolos citoplasmáticos, fusão de células vizinhas e, finalmente, morte celular. A contaminação foi detectada por imagens de fluorescência (DAPI) e reações de PCR. As culturas foram tratadas com antibiótico BM-Cyclin para eliminar a contaminação. Os dados aqui apresentados serão de relevância para pesquisadores cujas investigações envolvem cultura celular, principalmente células respiratórias e HEp-2.

Immunophenotyping, plasticity tests and nanotagging of stem cells derived from adipose tissue of wild rodent agouti (Dasyprocta prymnolopha) / Imunofenotipagem, testes de plasticidade e marcação com nanocristais de céluas-tronco derivadas de tecido adiposo em cutias

There is a growing interest in the study of unspecialized mesenchymal stem cells, for there are still some discussions about their in vitro behavior. Regenerative medicine is a science undergoing improvement which develops treatments as cell therapy using somatic stem cells. In several studies, adipose tissue is presented as a source of multipotent adult cells that has several advantages over other tissue sources. This study aimed to characterize and evaluate the tagging of mesenchymal stem cells from the agoutis adipose tissue (Dasyprocta prymonolopha), with fluorescent intracytoplasmic nanocrystals. Fibroblast cells were observed, plastic adherent, with extended self-renewal, ability to form colonies, multipotency by differentiation into three lineages, population CD90 + and CD45 - expression, which issued high red fluorescence after the tagging with fluorescent nanocrystals by different paths and cryopreserved for future use. It is possible to conclude that mesenchymal stem cells from agouti adipose tissue have biological characteristics and in vitro behavior that demonstrate its potential for use in clinical tests.(AU)

Há um interesse crescente no estudo das células estaminais mesenquimais, não especializadas, pois ainda existem algumas discussões sobre seu comportamento in vitro. A medicina regenerativa é uma ciência em fase de crescimento que desenvolve tratamentos como terapia celular utilizando células estaminais somáticas. Em vários estudos, o tecido adiposo é apresentado como uma fonte de células adultas multipotentes que tem várias vantagens em relação a outras fontes de tecido. Este estudo teve como objetivo caracterizar e avaliar a marcação de células estaminais mesenquimais do tecido adiposo de cutias (Dasyprocta prymnolopha) com nanocristais intracitoplasmáticos fluorescentes. Observaram-se células fibroblásticas, aderentes ao plástico, com autorrenovação prolongada, capacidade de formar colônias, diferenciação em três linhagens, população CD90 + e expressão CD45, que emitiram alta fluorescência vermelha após a marcação com nanocristais fluorescentes por diferentes vias, e criopreservadas para uso futuro. É possível concluir que as células estaminais mesenquimais do tecido adiposo de cutias têm características biológicas e comportamentos in vitro que demonstram seu potencial para uso em testes clínicos.(AU)

Expression of BMP II by human osteoblasts cultivated on dense or porous titanium / Expressão da BMP II por osteoblastos humanos cultivados sobre titânio denso ou poroso

Objective: Modifications of titanium have been described as an important tool improving bone repair and boneimplant contact. The aim of this research was to quantified the expression of the morphogenetic bone protein II (BMP II) produced by human cells with osteoblast differentiation, after cultured over dense or porous samples of pure titanium grade II. Material and Methods: The experimental groups were: control group, dense titanium, porosity of 33.79% and porosity of 41,79% (n=36). The samples were produced by powder metallurgy technique. Mesenquimal steam cells isolated from alveolar bone of healthy donors were stimulated to differentiate, assuming an osteoblastic phenotype, by supplemented medium and plated over the samples. After 7 and 14 days, the RNA was collected to perform reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) in real time. Data was analysed by t-Student and ANOVA tests. The porosity, the pore morphology and interconnection were evaluated by Scanning Electron Microscopy (SEM). Results: Total porosity (obtained after apply dimensions and density formulas) and surface porosity (SEM) presented significant differencesamong the groups. For the group of total porosity of 33.79%, the superficial porosity was 32.5% (± 7.74%) and for the group of 41.79%, the superficial porosity was 37.4% (± 7.95%), significantly lower. The expression of BMP II was similar in all groups. Conclusion: The present study demonstrated that powder metallurgy has a reduced ability to standardize the porosity in the samples and that the porosity does not interfere in the cellular response of BMP II production, an important inducer of osteoblastic differentiation. (AU)

Objetivo: As modificações do titânio são descritas como importantes ferramentas na melhora do reparo ósseo no contato osso implante. O objetivo deste estudo foi quantificar a expressão da proteína óssea morfogênica II (BMP II) por células humanas com diferenciação osteoblastica, quando cultivadas sobre amostras de titânio puro grau II, denso ou poroso. Material e Métodos: Os grupos experimentais foram: controle, titânio denso, titânio de maior porosidade e titânio de menor porosidade, sendo que, as amostras foram confeccionadas pela técnica da metalurgia do pó. As células isoladas de doadores saudáveis foram plaqueadas sobre as amostras. Após 7 e 14 dias, o RNA foi extraído das células. A qualidade e integridade do RNA foram analisadas qualitativamente por eletroforese e quantitativamente por espectrofotômetro. O cDNA foi confeccionado e a foi utilizada técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. Os dados foram utilizados para quantificação relativa, e o gene constitutivo foi a BetaActina. A morfologia e a interligação dos poros foram comprovadas por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Resultados: A porosidade superficial (MEV) teve diferença significativa em relação a porosidade obtida analisando-se volume e massa das amostras. Para o grupo 3,79%, a superficial foi de 32,5% (±7,74%) e para o grupo 41,79% a porosidade superficial foi de 37,4% (±7,95%), significativamente menor. A expressão da BMP II foi semelhante em todos os grupos. Conclusão: Concluiu-se a metalurgia do pó tem reduzida capacidade de padronização da porosidade das amostras por ela confeccionas e que a porosidade não interfere na resposta celular de produção da BMP II, importante indutor de diferenciação osteoblastica.(AU)

Diagnosis and treatment of HEp-2 cells contaminated with mycoplasma

Abstract Contamination of primary and cell cultures by mycoplasmas is one of the main economic and biological pitfalls in basic research, diagnosis and manufacture of biotechnological products. It is a common issue which may be difficult to conduct surveillance on. Mycoplasma presence may affect several physiological parameters of the cell, besides being considered an important source of inaccurate and/or non-reproducible scientific results. Each cell type presents characteristical symptoms, mainly morphological, that indicate a contamination by mycoplasma. HEp-2 cells originate from carcinoma of the larynx and are, therefore, part of the respiratory tract, which is one of mycoplasma habitats. Despite the importance these cells in several biological research (evaluation of cell proliferation and migration, apoptosis, antiviral and antitumor compounds), the alterations induced by mycoplasma contamination in HEp-2 cells have not yet been described. Here, we describe the progressive morphological alterations in culture of HEp-2 cells infected with mycoplasma, as well as the-diagnosis of the infection and its treatment. Mycoplasma contamination described within this work led to cytoplasm elongation, cell-to-cell spacing, thin plasma membrane projections, cytoplasmic vacuoles, fusion with neighboring cells, and, finally, cell death. Contamination was detected by fluorescence imaging (DAPI) and PCR reactions. The cultures were treated with BM-Cyclin antibiotic to eliminate contamination. The data presented here will be of relevance to researchers whose investigations involve cell culture, especially respiratory and HEp-2 cells.

Resumo A contaminação de culturas primárias e celulares por micoplasmas é uma das principais armadilhas econômicas e biológicas da pesquisa básica, diagnóstico e fabricação de produtos biotecnológicos. Trata-se de uma contaminação rotineira, mas de difícil acompanhamento. A presença de micoplasma pode afetar vários parâmetros fisiológicos da célula, além de ser considerada uma importante fonte de resultados científicos imprecisos e/ou não reprodutíveis. Cada tipo de célula apresenta sintomas característicos, principalmente morfológicos, que indicam uma contaminação por micoplasma. As células HEp-2 são originárias do carcinoma da laringe e, portanto, fazem parte do trato respiratório, um dos habitats do micoplasma. Apesar da importância destas células em diversas pesquisas biológicas (avaliação da proliferação e migração celular, apoptose, compostos antivirais e antitumorais), as alterações decorrentes da contaminação por micoplasma nestas células ainda não foi descrita. Aqui, descrevemos as alterações morfológicas progressivas na cultura de células HEp-2 infectadas por micoplasma, bem como o diagnóstico da infecção e seu tratamento. A contaminação por micoplasma descrita neste trabalho resultou em alongamento citoplasmático, espaçamento entre células, projeções delgadas da membrana plasmática, vacúolos citoplasmáticos, fusão de células vizinhas e, finalmente, morte celular. A contaminação foi detectada por imagens de fluorescência (DAPI) e reações de PCR. As culturas foram tratadas com antibiótico BM-Cyclin para eliminar a contaminação. Os dados aqui apresentados serão de relevância para pesquisadores cujas investigações envolvem cultura celular, principalmente células respiratórias e HEp-2.

Evaluation of genotoxicity and cytotoxicity of water samples from the Sinos River Basin, southern Brazil / Avaliação da genotoxicidade e da citotoxicidade de amostras de água da Bacia do Rio dos Sinos, sul do Brasil

Some water bodies in the Sinos River Basin (SRB) have been suffering the effects of pollution by residential, industrial and agroindustrial wastewater. The presence of cytotoxic and genotoxic compounds could compromise the water quality and the balance of these ecosystems. In this context, the research aimed to evaluate the genotoxicity and cytotoxicity of the water at four sites along the SRB (in the cities of Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom and Esteio), using bioassays in fish and cell culture. Samples of surface water were collected and evaluated in vitro using the Astyanax jacuhiensis fish species (micronucleus test and comet assay) and the Vero lineage of cells (comet assay and cytotoxicity tests, neutral red - NR and tetrazolium MTT). The micronucleus test in fish showed no significant differences between the sampling sites, and neither did the comet assay and the MTT and NR tests in Vero cells. The comet assay showed an increase in genetic damage in the fish exposed to water samples collected in the middle and lower sections of the basin (Parobé, Campo Bom and Esteio) when compared to the upper section of the basin (Santo Antônio da Patrulha). The results indicate contamination by genotoxic substances starting in the middle section of the SRB.

Alguns corpos d’água da Bacia Hidrográfica do Rio dos Sinos (BHRS) vêm sofrendo os efeitos da poluição por efluentes domésticos, industriais e agroindustriais. A presença de compostos citotóxicos e genotóxicos pode comprometer a qualidade da água e o equilíbrio desses ecossistemas. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a genotoxicidade e a citotoxicidade da água em quatro pontos ao longo da BHRS (Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom e Esteio), utilizando bioensaios em peixes e em cultura celular. As amostras de água de superfície foram coletadas e avaliadas in vitro utilizando a espécie de peixe Astyanax jacuhiensis (teste de micronúcleo e ensaio cometa) e a linhagem celular tipo Vero (ensaio cometa e os testes de citotoxicidade vermelho neutro - VN e tetrazólio MTT). O teste de micronúcleos em peixes não apresentou diferenças significativas entre os pontos de coleta, assim como o ensaio cometa e os testes VN e MTT nas células Vero. O ensaio cometa demonstrou aumento nos danos genéticos em peixes expostos às amostras de água coletadas nos trechos médio e inferior da bacia (Parobé, Campo Bom e Esteio) em relação ao trecho superior da bacia (Santo Antônio da Patrulha). Os resultados indicam contaminação por substâncias genotóxicas a partir do trecho médio da BHRS.

Evaluation of genotoxicity and cytotoxicity of water samples from the Sinos River Basin, southern Brazil

p>Some water bodies in the Sinos River Basin (SRB) have been suffering the effects of pollution by residential, industrial and agroindustrial wastewater. The presence of cytotoxic and genotoxic compounds could compromise the water quality and the balance of these ecosystems. In this context, the research aimed to evaluate the genotoxicity and cytotoxicity of the water at four sites along the SRB (in the cities of Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom and Esteio), using bioassays in fish and cell culture. Samples of surface water were collected and evaluated italic>in vitro /italic> using the italic>Astyanax jacuhiensis /italic> fish species (micronucleus test and comet assay) and the Vero lineage of cells (comet assay and cytotoxicity tests, neutral red - NR and tetrazolium MTT). The micronucleus test in fish showed no significant differences between the sampling sites, and neither did the comet assay and the MTT and NR tests in Vero cells. The comet assay showed an increase in genetic damage in the fish exposed to water samples collected in the middle and lower sections of the basin (Parobé, Campo Bom and Esteio) when compared to the upper section of the basin (Santo Antônio da Patrulha). The results indicate contamination by genotoxic substances starting in the middle section of the SRB. /p>

p>Alguns corpos dágua da Bacia Hidrográfica do Rio dos Sinos (BHRS) vêm sofrendo os efeitos da poluição por efluentes domésticos, industriais e agroindustriais. A presença de compostos citotóxicos e genotóxicos pode comprometer a qualidade da água e o equilíbrio desses ecossistemas. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a genotoxicidade e a citotoxicidade da água em quatro pontos ao longo da BHRS (Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom e Esteio), utilizando bioensaios em peixes e em cultura celular. As amostras de água de superfície foram coletadas e avaliadas italic>in vitro /italic> utilizando a espécie de peixe italic>Astyanax jacuhiensis /italic> (teste de micronúcleo e ensaio cometa) e a linhagem celular tipo Vero (ensaio cometa e os testes de citotoxicidade vermelho neutro - VN e tetrazólio MTT). O teste de micronúcleos em peixes não apresentou diferenças significativas entre os pontos de coleta, assim como o ensaio cometa e os testes VN e MTT nas células Vero. O ensaio cometa demonstrou aumento nos danos genéticos em peixes expostos às amostras de água coletadas nos trechos médio e inferior da bacia (Parobé, Campo Bom e Esteio) em relação ao trecho superior da bacia (Santo Antônio da Patrulha). Os resultados indicam contaminação por substâncias genotóxicas a partir do trecho médio da BHRS. /p>

Produção de IL-1beta, IL-6 e IL-8 por fibroblastos estimulados por cimentos endodônticos e submetidos à terapia laser de baixa potência / IL-1beta, IL-6 and IL-8 fibroblasts production stimulated by endodontic sealers and submitted to Low-Level Laser Therapy

O sucesso do tratamento endodôntico depende da cuidadosa realização de todas as suas fases, terminando com uma obturação tridimensional que alcance todo o sistema de canais radiculares. Desta forma, os materiais obturadores, ou as substâncias liberadas, entrarão em contato com os tecidos perirradiculares, o que poderá influenciar a resposta inflamatória e o processo de reparo. A terapia laser de baixa potência (TLBP) tem sido estudada quanto à sua ação anti-inflamatória, favorecendo o reparo. O objetivo deste estudo foi investigar a produção das citocinas IL-1β, IL-6 e IL-8 por fibroblastos de gengiva humana (linhagem FMM1) como resposta à presença dos extratos dos cimentos endodônticos AH Plus, MTA Fillapex e EndoSequence BC Sealer, bem como a eficácia da TLBP, neste modelo. Para isto, extratos destes cimentos, recém-manipulados e após 24 h do endurecimento, foram preparados em meio de cultura DMEM fresco, conforme as normas ISO 10993-12. Inicialmente, a citotoxicidade dos cimentos foi avaliada, após a interação das células com a diluição seriada destes extratos (1:1 a 1:16), por meio do ensaio MTT. Para a análise da produção de citocinas, 106 células por poço foram cultivadas em placas de cultura de 24 poços, para a interação com os extratos dos cimentos, na diluição 1:4. Estabeleceram-se os grupos não irradiado e irradiado. No grupo irradiado, as culturas celulares receberam duas irradiações do laser InGaAlP (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2 e área do feixe de 0,028 cm2), com intervalo de 12 h. O grupo não irradiado foi submetido às mesmas condições ambientais que o irradiado. Os sobrenadantes das culturas foram coletados, centrifugados, aliquotados e armazenados congelados, para a posterior análise pelo ensaio de ELISA. Todos os dados obtidos (médias ± erro padrão) foram tratados estatisticamente por ANOVA one-way, complementado pelo teste de Tuckey e ANOVA ...

Endodontic treatment success depends on careful accomplishment of all steps, finishing with a three-dimensional obturation that reachs the entire root canal system. Thus, the obturation materials or the substances that are released will be in contact with perirradicular tissues, which may influence the inflammatory response and the repair process. Low-level laser therapy (LLLT) has been studied about its anti-inflammatory action, improving the repair. The aim of this study was to investigate the production of IL-1β, IL-6 and IL-8 cytokines by human gingival fibroblasts (FMM1 lineage) as a response to the extracts of the endodontic cements AH Plus, MTA Fillapex and EndoSequence BC Sealer, besides the effectiveness of LLLT in this model. For that, freshly mixed and 24 h-set elutes of these sealers were prepared, in fresh DMEM, in accordance with ISO 10993-12. Firstly, cytotoxicity was assessed after cells were treated with cements extracts serial dilution (1:1 to 1:16), by MTT assay. To evaluate the cytokines production, 106 cells per well were cultured at 24-well-plates to interact with the 1:4 dilution of sealers extracts. Non-irradiated and irradiated groups were established. On the irradiated group, the cell culture received two InGaAlP laser irradiation (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2, 0.028 cm2 spot size) at 12h-interval. The non-irradiated group was submitted to the same environment conditions of the irradiated group. The culture supernatants were collected, centrifuged, aliquoted and stored frozen to further analyse by ELISA assay. Data obtained (media ± standard error) were treated by ANOVA one-way, complemented by Tuckey’s test and ANOVA two-way, with Bonferroni correction (p< 0.05). The cytotoxicity of AH Plus and EndoSequence BC Sealer was related to time/dose-dependent manner, whilst MTA Fillapex cytotoxicity was showed ...

Produção de IL-1beta, IL-6 e IL-8 por fibroblastos estimulados por cimentos endodônticos e submetidos à terapia laser de baixa potência / IL-1beta, IL-6 and IL-8 fibroblasts production stimulated by endodontic sealers and submitted to Low-Level Laser Therapy

O sucesso do tratamento endodôntico depende da cuidadosa realização de todas as suas fases, terminando com uma obturação tridimensional que alcance todo o sistema de canais radiculares. Desta forma, os materiais obturadores, ou as substâncias liberadas, entrarão em contato com os tecidos perirradiculares, o que poderá influenciar a resposta inflamatória e o processo de reparo. A terapia laser de baixa potência (TLBP) tem sido estudada quanto à sua ação anti-inflamatória, favorecendo o reparo. O objetivo deste estudo foi investigar a produção das citocinas IL-1β, IL-6 e IL-8 por fibroblastos de gengiva humana (linhagem FMM1) como resposta à presença dos extratos dos cimentos endodônticos AH Plus, MTA Fillapex e EndoSequence BC Sealer, bem como a eficácia da TLBP, neste modelo. Para isto, extratos destes cimentos, recém-manipulados e após 24 h do endurecimento, foram preparados em meio de cultura DMEM fresco, conforme as normas ISO 10993-12. Inicialmente, a citotoxicidade dos cimentos foi avaliada, após a interação das células com a diluição seriada destes extratos (1:1 a 1:16), por meio do ensaio MTT. Para a análise da produção de citocinas, 106 células por poço foram cultivadas em placas de cultura de 24 poços, para a interação com os extratos dos cimentos, na diluição 1:4. Estabeleceram-se os grupos não irradiado e irradiado. No grupo irradiado, as culturas celulares receberam duas irradiações do laser InGaAlP (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2 e área do feixe de 0,028 cm2), com intervalo de 12 h. O grupo não irradiado foi submetido às mesmas condições ambientais que o irradiado. Os sobrenadantes das culturas foram coletados, centrifugados, aliquotados e armazenados congelados, para a posterior análise pelo ensaio de ELISA. Todos os dados obtidos (médias ± erro padrão) foram tratados estatisticamente por ANOVA one-way, complementado pelo teste de Tuckey e ANOVA...

Endodontic treatment success depends on careful accomplishment of all steps, finishing with a three-dimensional obturation that reachs the entire root canal system. Thus, the obturation materials or the substances that are released will be in contact with perirradicular tissues, which may influence the inflammatory response and the repair process. Low-level laser therapy (LLLT) has been studied about its anti-inflammatory action, improving the repair. The aim of this study was to investigate the production of IL-1β, IL-6 and IL-8 cytokines by human gingival fibroblasts (FMM1 lineage) as a response to the extracts of the endodontic cements AH Plus, MTA Fillapex and EndoSequence BC Sealer, besides the effectiveness of LLLT in this model. For that, freshly mixed and 24 h-set elutes of these sealers were prepared, in fresh DMEM, in accordance with ISO 10993-12. Firstly, cytotoxicity was assessed after cells were treated with cements extracts serial dilution (1:1 to 1:16), by MTT assay. To evaluate the cytokines production, 106 cells per well were cultured at 24-well-plates to interact with the 1:4 dilution of sealers extracts. Non-irradiated and irradiated groups were established. On the irradiated group, the cell culture received two InGaAlP laser irradiation (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2, 0.028 cm2 spot size) at 12h-interval. The non-irradiated group was submitted to the same environment conditions of the irradiated group. The culture supernatants were collected, centrifuged, aliquoted and stored frozen to further analyse by ELISA assay. Data obtained (media ± standard error) were treated by ANOVA one-way, complemented by Tuckey’s test and ANOVA two-way, with Bonferroni correction (p< 0.05). The cytotoxicity of AH Plus and EndoSequence BC Sealer was related to time/dose-dependent manner, whilst MTA Fillapex cytotoxicity was showed...

Human umbilical cord vein as a source of osteoblastic cells / Veia de cordão umbilical humano como fonte de células osteoblásticas

Objective: Regenerative medicine and tissue engineering are searching for novel stem cell based therapeutic strategies that will allow for efficient treatment or even potential replacement of damaged organs. The purpose of this work was to study the behavior of human umbilical cord vein cells (UCVs) through osteoblastic differentiation. Material and Methods: Cells were isolated, expanded and cultivated in osteogenic medium. After 7, 14 and 21 days of culture, cell morphology, proliferation, viability and alkaline phosphatase (ALP) activity were evaluated. Immunolocalization of ALP was performed after 1, 7 and 14 days of culture and cells were analyzed in a fluorescence microscope. Statistical test utilized was Mann-Whitney (p < 0.05). Results: The results showed that osteogenic medium induced morphological changes in UCVs. Besides, it permitted cell viability and proliferation, as well as an increase in alkaline phosphatase expression and activity. Conclusion: It is concluded that these cells can differentiate into osteoblastic-like cells, contributing to applications for cell therapy and tissue engineering.

Objetivo: A medicina regenerativa e engenharia de tecidos estão à procura de estratégias terapêuticas baseadas em células-tronco que permitam tratamento eficiente ou até mesmo potencial substituição de órgãos danificados. O objetivo deste trabalho foi estudar o comportamento das células da veia do cordão umbilical humano (UCVs) através da diferenciação osteoblástica. Material e Métodos: As células foram isoladas, expandidas e cultivadas em meio osteogênico. Depois de 7, 14 e 21 dias de cultura, foram avaliadas a morfologia celular, a proliferação, a viabilidade e a fosfatase alcalina (ALP). Imunolocalização de ALP foi realizada após 1, 7 e 14 dias de cultura e as células foram analisadas em microscópio de fluorescência. O teste estatístico utilizado foi de Mann-Whitney (p < 0,05). Resultados: Os resultados mostraram que o meio osteogênico induziu alterações morfológicas nos UCVs. Além disso, foram evidenciadas viabilidade e proliferação celulares, bem como um aumento na expressão e atividade da fosfatase alcalina. Conclusão: Conclui-se que as células utilizadas no presente estudo podem diferenciar-se em células semelhantes à osteoblastos, contribuindo para aplicações em terapia celular e engenharia de tecidos

Implante de condrócitos homólogos em defeitos osteocondrais de cães: padronização da técnica e avaliação histopatológica / Homologous articular chondrocytes implantation in osteochondral defects of dogs: technique and histopathological evaluation standardization

Padronizou-se a metodologia para cultura de condrócitos em cães e avaliou-se seu implante em lesões osteocondrais, utilizando-se a membrana biossintética de celulose (MBC) como revestimento. Dez cães, adultos e clinicamente sadios, foram submetidos à artrotomia das articulações fêmoro-tíbio-patelares. Defeitos de 4mm de diâmetro e profundidade foram induzidos no sulco troclear de ambos os membros. MBC foi aplicada na base e na superfície das lesões. Os defeitos do membro direito foram preenchidos com condrócitos homólogos cultivados formando o grupo-tratado (GT); os do membro esquerdo, sem implante celular, foram designados grupo-controle (GC). A evolução pós-operatória foi analisada com especial interesse nos processos de reparação da lesão, por meio de histomorfometria e imuno-histoquímica para colágeno tipo II e sulfato de condroitina. A cultura de condrócitos homólogos apresentou alta densidade e taxa de viabilidade. Observou-se integridade do tecido neoformado com a cartilagem adjacente na avaliação histológica, em ambos os grupos. Na imuno-histoquímica, verificou-se predomínio de colágeno tipo II no GT. Morfometricamente, não houve diferença significativa entre o tecido fibroso e o fibrocartilaginoso entre os grupos. A cultura de condrócitos homólogos de cães foi exequível. O tecido neoformado apresentou qualidade discretamente superior associado ao implante homólogo de condrócitos, contudo não promoveu reparação por cartilagem hialina.

The aim of the study is to standardize the methodology to achieve canine chondrocytes culture, and evaluate its implant on osteochondral defects made in the femoral trochlear sulcus of dogs, using the cellulose biosynthetic membrane (CBM) as coating. Ten healthy adult dogs without locomotor disorders were used. All animals were submitted to arthrotomy of stifle joints and defects of four millimeters in diameter x four millimeters deep were done in the femoral trochlear sulcus of both limbs. CBM were applied in the lesion base and surface of all limbs. In the treated group (TG), defects of the right limb were filled with cultivated homologous chondrocytes, and in control group (CG), defects of the left limb were left without cellular implant. Postoperative follow up was done by histomorphometry and Collagen type II and anti-chondroitin sulfate immunohistochemistry. The homologous chondrocytes culture showed high density and viability rate. Upon immunohistochemistry the predominance of type II collagen in extracellular matrix of TG was verified. However, no significant statistical difference was observed between the groups upon histomorphometry analysis of fibrous and fibrocartilaginous tissues. Canine homologous chondrocytes culture was practicable. Neoformed tissue showed slightly higher quality in TG, but without promoting repair by the hyaline cartilage.

Cytotoxicity of non-vital dental bleaching agents in human gingival fibroblasts / Avaliação da citotoxicidade de agentes clareadores de uso interno sobre fibroblastos gengivais humanos

Objective: The aim of this study was to compare several non-vital dental bleaching agents for their in vitro cytotoxicity to human gingival fibroblasts primary cell line. Methods: The cells were cultivated in DMEM and were seed in plates of 96 wells; then, it was exposed to the conditioned medium according to the experimental groups (n = 12): G1 - SP (sodium perborate) + distilled water; G2 - SP + 20% CP (carbamide peroxide); G3 - 20% CP; G4 - SP + 35% HP (hydrogen peroxide); G5 - 35% HP. In the control group (n = 12), corresponded to the curve of cell growth and viability, the cells did not receive any treatment. Cell viability was measured photometrically using a MTT assay after a 24 h and 48 h of exposure period. Data were submitted to ANOVA and Tukey’s tests. Results: All the experimental groups presented high cytotoxicity statically in comparison to the control group. The rank of the most to the least toxic material after 24 h was: SP + DW > 35% PH > PS + 20% PC > PS + 35% PH > 20% PC; and after 48 h was: SP + DW > PS + 20% PC > 35% PH > PS + 35% PH > 20% PC. Conclusion: All the bleaching agents had presented cytotoxicity effects, reducing significantly the cell viability, however, in the conditions that the study was conducted the association of sodium perborate with distilled water was the most toxic bleaching agent

Objetivo: O objetivo deste estudo foi comparar a citotoxicidade de agentes clareadores de uso interno em linhagem primária de fibroblastos humanos. Material e Método: As células foram cultivadas em meio DMEM e semeadas em placas de 96 poços. Em seguida, foram expostas aos meios de cultura condicionados de acordo com os grupos experimentais (n = 12): G1 - PS (perborato de sódio) + água destilada; G2 - PS + PC 20% (peróxido de carbamida); G3 - PC 20% ; G4 - PS + PH 35% (peróxido de hidrogênio); G5 - PH 35%. No grupo controle (n = 12), correspondente à curva de crescimento e viabilidade celular, as células não receberam nenhum tratamento. A viabilidade celular foi verificada por espectofotômetro utilizando o ensaio de MTT, após um período de 24 e 48 h de exposição aos agentes clareadores. Os dados foram submetidos aos testes de ANOVA e Tukey. Resultados: Todos os grupos experimentais apresentaram alta citotoxicidade em relação ao grupo controle. O rank de citotoxicidade dos agestes clareadores após 24 h foi: PS + AD > PH 35% > PS + PC 20% > PS + PH 35% > PC 20% e após 48h foi: PS + AD > PS + PC 20%> 35% PH > PS +PH 35% > 20% PC. Conclusão: Todos os agentes clareadores apresentaram efeitos citotóxicos, reduzindo significativamente a viabilidade da celular. Entretanto, nas condições em que o estudo foi conduzido a associação do perborato de sódio com água destilada, foi o agente clareador mais tóxico

Isolation, cultivation and characterization of CD133+ stem cells from human glioblastoma / Isolamento, cultivo e caracterização de células-tronco CD133+ de glioblastoma humano

Objetivo: Estabelecer o método de isolamento e cultivo das neuroesferas de glioblastoma humano, bem como purificação de suas células-tronco, seguido do processo de obtenção de subesferas tumorais, caracterizando imunofenotipicamente esse conjunto clonogênico. Métodos: Por meio do processamento de amostras de glioblastomas (n=3), cumpriu-se a seguinte estratégia de ação: (i) estabelecimento da cultura primária de glioblastoma; (ii) isolamento e cultura de neuroesferas tumorais; (iii) purificação das células que iniciam os tumores (CD133+) por sistema de separação magnética (MACS); (iv) obtenção subesferas tumorais; (v) estudo da expressão de marcadores GFAP, CD133 e nestina. Resultados: Este estudo descreveu com sucesso o processo de isolamento e cultivo de subesferas de glioblastoma, as quais são constituídas por um conjunto clonogênico de células caracterizadas imunofenotipicamente como neurais, capazes de iniciar a formação tumoral. Conclusão: Estes achados poderão contribuir para a compreensão do processo de gliomagênese.

Desenvolvimento de culturas tridimensionais de células e sua aplicação na avaliação de biocompatibilidade de materiais poliméricos / Development of three-dimensional cell cultures and their application on evaluation of polymeric materials biocompatibility

Materiais poliméricos têm sido usados em um vasto número de aplicações médicas e farmacêuticas, caracterizando-se como biomateriais. Antes do uso humano, se faz necessário uma criteriosa programação de testes que permitam investigação da segurança do material e avaliação da eficácia e assim, avaliar sua biocompatibilidade. Essa atenção também tem sido aplicada a materiais nanoparticulados, inclusive de constituição polimérica. Sendo assim, antes da liberação destes materiais para uso humano, testes preliminares são feitos in vitro e in vivo, neste caso com experimentação animal. Paralelamente à crescente busca em se manter a segurança biológica, a ciência tem procurado metodologias alternativas para se obter resultados seguros e que possam substituir os obtidos in vivo. Neste contexto, surge grande interesse no uso de culturas celulares, primeiramente em monocamadas e posteriormente, o desenvolvimento de culturas celulares em estrutura tridimensional, mimetizando de maneira mais próxima o que ocorre in vivo. Considerando as diversas vantagens obtidas no estudo de culturas tridimensionais, este estudo teve como objetivo desenvolver tal modelo, visando simular sistemas de avaliação para biocompatibilidade de materiais poliméricos, testando nanopartículas de polibutilcianoacrilato. Foram cultivadas células de fibroblasto e melanócito humanos e células de melanoma (SK-Mel-103) em monocamada e em matriz tridimensional de colágeno tipo I e avaliada a citotoxicidade em 24, 48 e 72 horas das nanopartículas utilizando os testes de Exclusão Azul de Tripan e MTT. Os resultados indicam que as nanopartículas de polibutilcianoacrilato são mais citotóxicas com o aumento da concentração da amostra, assim como o IC50 foi decrescente ao longo dos dias, demonstrando a intensificação da resposta biológica no decorrer do tempo e foram mais citotóxicas para as células de melanoma. Este perfil de aumento de citotoxicidade com o passar do tempo também foi observado no ensaio clonogênico, onde as células foram cultivadas em monocamada e incubadas com a amostra até 14 dias. Os testes de viabilidade celular em cultura tridimensional evidenciaram faixa de IC50 um pouco maior do que em monocamada, demonstrando uma pequena redução na citotoxicidade quando avaliada no ambiente 3D. Foram feitos testes de caracterização do tipo de morte utilizando citometria de fluxo, confirmando os dados dos testes de viabilidade que indicam aumento de morte com o aumento da concentração de teste. A morte acontece por apoptose tardia. Nas concentrações próximas ao IC50, há indicação que as nanopartículas de polibutilcianoacrilato inibem a autofagia em fibroblastos e células de melanomas cultivados em monocamada, característica que é anulada quando o comportamento é avaliado em ambiente tridimensional. Os resultados indicam que nanopartículas de polibutilcianoacrilato podem levar a modificação da resposta celular dependendo da concentração empregada e do ambiente de cultivo das células, mostrando serem promissores o estudo e o emprego de ambiente tridimensional na avaliação de citotoxicidade de nanopartículas poliméricas

Polymeric materials have been widely used as biomaterials in medical and pharmaceutical applications. Before their use in humans, a number of tests is necessary to investigate the safety and effectiveness of the biomaterial in order to determine its biocompatibility. This attention has been given to nanoparticulate materials, including those of polymeric composition. Thus, in vitro and in vivo preliminary tests are done before these materials are released for human use. In parallel with the concern with biological safety studies, there has been a continuous effort in finding alternative methods to replace the current in vivo animal tests and provide reliable results regarding safety. In this context, great interest arises in the use of cell culture, firstly as monolayer and secondly as three-dimensional cell culture systems that mimic more closely the in vivo morphology. Taking into account all the advantages of three-dimensional cell culture studies, the aim of this work is to develop a three-dimensional model that can effectively evaluate polymeric biomaterials biocompatibility using polybutylcyanoacrylate nanoparticles. Cell culture of human fibroblasts, melanocytes and melanoma cells (SK-Mel-103) were cultured in monolayer and on type I collagen matrix. Polybutylcyanoacrylate nanoparticles cytotoxicity was evaluated in 24, 48 and 72 hours using Tripan Blue and MTT assays and the results found were dose and time-dependent to all cell types. Moreover, melanoma cells were significantly more sensitive to the nanoparticles toxicity. The same profile of cytotoxic response was observed in the clonogenic assay, where cells were cultured in low-density monolayer and incubated with the nanoparticles for 14 days. Cell viability assays in 3D culture had a slightly higher IC50 range when compared to the monolayer results, which suggests a reduction in the nanoparticle cytotoxicity in the 3D environment. Cell death analysis using flow cytometry confirmed the dose-dependent response obtained by cell viability assays. Cell death occurred mostly via late apoptosis. There is suggestive evidence that treatment with polybutylcyanoacrylate nanoparticles in concentrations close to the IC50 inhibits autophagy in fibroblasts and melanoma cells when cultured in monolayers, but this response could not be observed in the 3D environment. Our results showed that polybutylcyanoacrylate nanoparticles can modify cell response depending on the concentration used and the conditions of cell culture. We conclude that the 3D cell culture is a promising method for the evaluation of polymeric nanoparticles cytotoxicity

Isolamento de células osteoprogenitoras derivadas de sangue de cordão umbilical humano: um candidato promissor para terapias celulares para o reparo ósseo / Isolation of human umbilical cord blood-derived osteoprogenitor cells: a promising candidate for cell-based therapy for bone repair

Objective: The aim of this study was to evaluate the osteogenic potential of human umbilical cord blood-derived osteoprogenitor cells and to prove its applicability as a promising candidate for cell-based therapeutics for bone repair. Methods: Primary cultures of human umbilical blood cord adherent cells were expanded in vitro until passage 2 and seeded for osteodifferentiation study. Morphological (light microscopy), cytochemical (Von Kossa's method), and functional analyses (calcium level, alkaline phosphatase activity, and total protein content in cell culture) were carried out 7, 14, 21, and 28 days after the osteoinduction protocol. Results: The proliferative step showed colony-forming units in 7 days. After osteoinduction, cuboidal cellular morphology similar to osteoblasts at 14 days and mineralization nodules and biochemical changes (increased alkaline phosphatase level and calcium deposits) at 21 days confirmed the osteodifferentiation process. Conclusion: Cell culture of human umbilical blood cord is a reliable technique, constituting itself as an alternative source of osteoprogenitor cells for experimental needs. More animal tests and clinical trials must be carried out to validate its use and to establish quality control of future autologous or allogeneic cell-based therapy aimed at bone repair.

Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial osteogênico de células osteoprogenitoras de sangue de cordão umbilical humano e provar sua aplicabilidade como candidato promissor para terapias celulares de reparo ósseo. Métodos: Culturas primárias de células aderentes de sangue de cordão umbilical humano foram expandidas in vitro até a passagem 2 e semeadas para estudo de osteodiferenciação. Análises morfológicas (microscopia de luz), citoquímicas (método de Von Kossa), e funcionais (dosagem de cálcio, atividade de fosfatase alcalina e conteúdo total de proteína na cultura celular) foram conduzidas em 7, 14, 21, e 28 dias após o protocolo de osteoindução. Resultados: A fase proliferativa demonstrou unidades formadoras de colônia em 7 dias. Após osteoindução, a morfologia celular cuboidal similar a osteoblastos em 14 dias e nódulos de mineralização e mudanças bioquímicas (aumento do nível de fosfatase alcalina e depósitos de cálcio) em 21 dias confirmaram o processo de osteodiferenciação. Conclusões: A cultura celular de sangue de cordão umbilical humano é uma técnica segura, constituindo-se uma fonte alternativa de células osteoprogenitoras para usos experimentais. Mais testes em animais e ensaios clínicos devem ser conduzidos para validar seu uso e estabelecer controle de qualidade de futuras terapias celulares autólogas ou alogênicas objetivando o reparo ósseo.

Transplante autólogo de condrócitos / Autologous chondrocyte implantation

Esta revisão da literatura descreve o processo do transplante autólogo de condrócitos em todas as suas etapas, indicações clínicas, técnica operatória, técnica laboratorial, reabilitação e resultados clínicos. Desde 1994, quando a técnica de ACI foi descrita pela primeira vez, este procedimento foi aprimorado e tornou-se uma das mais importantes alternativas cirúrgicas para o tratamento das lesões condrais do joelho. Nivel de Evidência II, Prospectivo Comparativo.

This literature review article describes the autologous chondrocyte implantation (ACI) process - its stages, clinical indications, surgical technique, laboratory protocol, rehabilitation and clinical outcomes. Since 1994, when the ACI was described for the first time, the procedure has improved to become one of the most important surgical alternatives for the treatment of chondral lesions of the knee.

Cryptomoscatona D2 de Cryptocarya mandioccana: atividade citotóxica contra linhagem celular de carcinoma cervical humano / Cryptomoschatone D2 from Cryptocarya mandioccana: cytotoxicity against human cervical carcinoma cell lines

Among the substances isolated from Cryptocarya sp, some styrylpyrones, such as goniothalamin, demonstrate antiproliferative activity in a broad range of human cell lines. In the present study, we assessed the cytotoxicity of a styrylpyrone (cryptomoschatone D2), isolated from Cryptocarya mandiocanna, in HPV-infected (HeLa and SiHa) and uninfected (C33A) human cervical carcinoma cell lines and a human lung fibroblast line (MRC-5). The cytotoxicity was tested by the MTT assay. In this assay, cells were treated with cryptomoschatone D2 at 15, 30, 60 or 90 ?M for 6, 24 or 48 hours, as well as for 6 hours followed by a post-treatment recovery period of 24, 48 or 72 hours. High cytotoxicity (dose- and timedependent) was observed in HeLa, SiHa, C33A and MRC-5 cell lines. Although in general the styrylpyrone cytotoxicity was not significantly different among the cell lines tested, it was apparently stronger in HeLa and C33A than in MRC-5 and SiHa in the 24 or 48-hour treatments. Moreover, HeLa and SiHa were able to recover their ability to proliferate, in direct proportion to the post-treatment recovery time. On the other hand, C33A did not demonstrate a similar post-treatment recovery. We can conclude that cryptomoschatone D2 possesses high dose-dependent or time-dependent cytotoxicity.

Dentre as substâncias isoladas de Cryptocarya sp, algumas estirilpironas, como a goniotalamina, apresentam atividade antiproliferativa em diferentes linhagens celulares. No presente estudo, foram avaliadas as atividades citotóxica de uma estirilpirona (criptomoscatona D2) isolada de Cryptocarya mandiocanna, em linhagens celulares de carcinoma cervical humano infectada por HPV (HeLa e SiHa), não infectada (C33A) e fibroblasto pulmonar humano (MRC-5). A atividade citotóxica foi avaliada pelo ensaio do MTT. No ensaio do MTT, as células foram tratadas com criptomoscatona D2 em 15, 30, 60 e 90 ?M por 6, 24 e 48 horas e por 6 horas com período de recuperação de 24, 48 e 72 horas pós-tratamento. O tratamento com a estirilpirona (criptomoscatona D2) ocasionou elevada citotoxicidade dose-resposta e tempo-resposta em HeLa, SiHa, C33A e MRC-5. Embora não haja diferença estatisticamente significativa de citotoxicidade entre as linhagens, aparentemente a citotoxicidade foi maior em HeLa e C33A (tratamento de 24 e 48 horas) que em MRC-5 e SiHa. Ainda, no período de recuperação, HeLa e SiHa aparentemente restabelecem sua capacidade proliferativa, que é diretamente proporcional ao tempo de recuperação, enquanto o mesmo comportamento não é observado em C33A. Estes resultados sugerem que criptomoscatona D2 possui elevada atividade antiproliferativa dose-resposta ou o tempo resposta.